结果显示 牛樟芝酒精萃物
说明牛樟芝酒精萃物
肾脏
牛樟芝( Antrodiacamphorata)，其生理活性成分被认为具有抗肿瘤、增加免疫能力、抗高血压、等多种功效。同时在近年来，已开始陆续发现其中的特定成分可能具有抗发炎的功效，特别是可用于治疗肾脏疾病等。
一般常见的肾脏疾病，常是透过攻击肾丝球而影响肾脏功能。肾丝球疾病包括多种基因及环境因素所导致的许多病症，但不外乎主要分成肾丝球硬化症及肾丝球肾炎两大类。
肾丝球硬化症是指肾脏中的肾丝球硬化。一般是指肾脏的的微血管、肾丝球、及用以从血液过滤尿液的肾脏功能单元损伤。尿蛋白（尿液中量最多的蛋白质）是肾丝球硬化症的讯号之一。肾脏损伤会影响肾脏过滤功能，且造成蛋白由血液渗漏至尿液中。然而，肾丝球硬化症仅为尿蛋白过多的成因之一。而肾脏切片可能为判断病人是否患肾丝球硬化症或其他肾脏疾病的必要判断依据。肾丝球硬化症，可特别意指局部性肾丝球硬化症(FSGS)及结节性肾丝球硬化症。
结节性肾丝球硬化症或毛细血管间肾小球肾炎，亦可称之为糖尿病肾脏病变（糖尿病肾病）或基-威二氏症(Kimmelstiel-Wilson syndrome)，是为一种进行性肾病，其是起因于肾丝球之毛细血管病变。此病的特征为肾病病变及弥漫性肾丝球硬化；并起因于长时间患糖尿病，且各国的主要治疗方式为洗肾。
肾丝球
最常见的肾丝球肾炎为免疫球蛋白A型肾丝球肾炎(IgAN)，造成此肾炎加速发展的病因仍无法预测，且临床上仍无法预防及治疗，故被视为可能会造成肾病的慢性肾衰竭的主要因素之一。因此，在IgAN病患的肾脏中，即便其他免疫上、临床上及病理上的因素皆会造成肾衰竭，但系统性T细胞活化及淋巴球／巨噬细胞／嗜中性白血球浸润等不正常增加，被视为造成IgAN转换成慢性肾衰竭的主要过程之一。再者，氧化厌力为主要造成病患中及动物模型中IgAN增加及发展的因素；曾有报导指出，在多数的人类及实验性肾病中(包括IgAN)，活性氧(ROS)会直接引发疾病。
目前诸多实验已得知牛樟芝萃取物具有诸多医疗功效，且其所含成分亦陆续被分析出，但牛樟芝萃取物中是否具有其他可有效治疗肾脏疾病的化合物，仍是亟待解决之一课题。
一氧化氮( Nitric oxide，NO)为自由基，在多种类型的肾丝球肾炎中扮演重要的致病角色。细菌内毒素脂多醣体(lipopolysaccharide，LPS)和细胞激素可诱发肾丝球肾膈细胞( mesangial cells)中诱导型一氧化氮合成酶；(inducible nitric oxide synthase，iNOS)表现及大量NO生成，直接参与肾丝球发炎反应。除此，NO在髓内可经由扮演讯息传导者之角色来调控促发炎基因或转录因子的表现，多方面地参与肾丝球肾炎的发生。抑制iNOS表现或活性可能是治疗肾丝球球肾炎的有效策略。牛樟芝是传统使用的真菌类，它曾被报导具有抗氧化、抗肿瘤以及免疫调节等功效。
本实验研究的目的即探讨牛樟芝通过抑制由细菌内毒素脂多醣体( lipopolysac-charide，LPS)诱发肾丝球膈细胞(mesangial cells)的发炎反应及治疗肾丝球肾炎的可行性。
1材料与方法
1.1 试剂药品
牛樟芝萃取物。取牛樟芝以10倍量的酒精抽取2次后合并浓缩得到一粗抽物(ACE)，将该粗抽物以二氯甲烷／水(1：1)进行分配萃取法3次，以分为一二氯甲烷层及一水层，取该二氯甲烷层以矽膫柱层析法经过正己烷／二氯甲烷(1：4)、二氯甲烷、甲醇／二氯甲烷(5：95)的溶液分离得到该萃取物< Antrocamols>。
1.2 试验方法
1)细胞培养。老鼠肾脏膈细胞株CRL-1927来自美国菌种保存中心(The American Type Culture Collection;罗克韦尔，马里兰州，美国)。细胞培养在DME培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium)与Ham's F-12 medium (BioWhittaker, Walk-ersville，MD)3：1的混合培养基中。培养基添加5%胎牛血清及14mM HEPES缓冲溶液(5% fetal bovine serum and 14mM HEPES).
2) 测量细胞内ROS的产生。通过检测荧光强度的2’，7’-二氯二氢荧光素的氧化产物（2’，7’-氯二氢荧光素二乙酸酯；分子探针，尤金），来测定细胞内活性氧的产生。 肾脏膈细胞加入用纯提取物2’，7’-氯二氢荧光素二乙酸酯（2μM）及LPS(LPS所诱发的NO生成)溶液共培育30分钟，然後检测荧光强度，2’，7’-二氯二氢荧光素可检测到一个激光波长为485 nm，在微量培养板的吸光度阅读器（Bio-Rad公司寅黢室，Inc裂造）上的发光波长为530nm。
3) 酶联免疫assayMCP-I在培养物上清液中的蛋白质的测定：使用商业ELISA试剂盒(Biosciences公司，洛杉矶，CA，USA)按照制造商的说明。在450 nm处的吸光度测定用ELISA板读数器（Bio-Tek的公司）。
2 结果
利用肾脏膈细胞( Mesangial cell)检测平台侦测牛樟芝酒精萃物(ACE)：结果显示于5分钟时浓度在0.024 mg/ml时，可降低由LPS所诱发的氧化厌力。
利用巨噬膈细胞( Macrophage cell)检测平台侦测牛樟芝酒精萃物(ACE)：结果显示于5分钟浓度在0.78125 mg/ml时，可降低由LPS所诱发的氧化厌力。
利用肾脏膈细胞(Mesangial cell)检测平台侦测牛樟芝萃取物Antrocamol LTI(ANCA-D-34>：结果显示于≤0.048mg/ml浓度均不影响肾脏膈细胞生长，将以0．048mg/ml进行抑制氧化厌力(ROS)分析，结果显示于5分钟时0.048 mg/ml可以抑制氧化厌力14%。0.012 mg/ml可以抑制氧化厌力3%。
利用肾脏膈细胞(Mesangial cell)检测平台侦测牛樟芝萃取物（ANCA-D-33）：结果显示于≤0.048mg/ml浓度均不影响肾脏膈细胞生长，将以0.048mg/ml进行抑制氧化厌力(ROS)分析，结果显示于5分钟时0.048 mg/ml可以抑制氧化厌12.5%。
利用肾脏膈细胞(Mesangial cell)检测平台侦测牛樟芝萃取物
由试验结果牛樟芝酒精萃物
3 讨论
牛樟芝酒精萃物
一氧化氮( Nitric oxide，NO)为自由基，在多种类型的肾丝球肾炎中扮演重要的致病角色。细菌内毒素脂多醣体(lipopolysaccharide，LPS)和细胞激素可诱发肾丝球肾膈细胞(mesangial cells)中诱导型一氧化氮合成酶；(inducible nitric oxide synthase，iNOS)表现及大量NO生成，直接参与肾丝球发炎反应。牛樟芝可能通过抑制氧化氮合成酶；(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的表现及抑制NO的生成，而抑制肾脏膈细胞由LPS所诱发的氧化厌力及抑制发炎反应。因此牛樟芝是值得再深入研究探讨及开发成肾脏发炎的新药。