2.比较牛樟芝子实体滴丸及牛樟芝子实体粉末口服后,于小鼠体内药物吸收度及血中浓度变化之药代动力学关系。
3.观察牛樟芝子实体滴丸对腹腔注射APAP的大白鼠肝功能指数之影响与变化情形,以及SOD及GPx等相关抗氧化酶酵素的活性表现,探讨其对于肝脏损伤的保护功效。
方法
1.采用固体分散技术
将牛樟芝子实体的水及醇的提取物制备成滴丸剂型,并以实验设计法找出最佳处方。其中以管拄法分离纯化出已知保肝成份Antcin B,以做为牛樟芝滴丸成分分析的指标成份。再利用液相层析仪、傅立叶变换红外光谱仪、电子显微镜检查及体外溶出试验等建立滴丸质量控制标准。
2.由体内血清药代动力学试验
进行牛樟芝滴丸口服生体可用率药理活性研究,依给药方式分为静脉注射及口服两组,以成年雄性Sprague-Dawley大白鼠(230-280g)进行实验,每组六只大白鼠,共十二只。并于颈静脉插管,作为采血途径。以乙醇溶解牛樟芝滴丸,剂量为50mg/kg,牛樟芝粉末,剂量为1g/kg,手术后十二小时给药,由颈静脉抽取0.2mL之血液,去除蛋白质,取上层澄清液以HPLC进行AntcinB含量分析。
3.护肝功能药理活性研究
将研究组别分为
A.正常对照组：生理食盐水(I.P.)+d.d.H20(P.0.)
B.负对照组(肝损伤组)：400mg APAP/kg bw(I.P.)+d.d.H20(P.0.)
C.正对照组(N-acetylcysteine(NAC)治疗对照组)：400mg APAP/kg bw(I.P.)+600mg NAC/kg bw(P.0.)
D.牛樟芝滴丸一倍剂量(1X)实验组：400mg APAP/kg bw(I.P.)+牛樟芝滴丸(20颗/kg bw)(P.O.)
E.牛樟芝滴丸3倍剂量(3X)实验组：400mg APAP/kg bw(I.P.)+牛樟芝滴丸(60颗/kg bw)(P.O.)
F.牛樟芝滴丸5倍剂量(5X)实验组：400mg APAP/kg bw(I.P.)+牛樟芝滴丸(100颗/kgbw)(P.O.)。
A组腹腔注射生理食盐水(0.6ml/30g bw for mice),B-F组腹腔注射400mgAPAP/kg bw(0.6ml/30g bw for mice),每周两次(星期一及四)于样品灌喂前一小时进行肝炎诱导,所有实验动物每周投予试验样品(d.d.H2O或NAC)后4小时,以尾部采血方式检测肝脏的生化功能：GOT(AST)、GPT(ALT)。
最后于第八周结束时全部牺牲,并剖腹取肝脏标本,进行病理学观察并做胶原蛋白的特殊染色(Masson's trichrome stain)。另外将其余肝脏分别进行检测抗氧化成分glutathione (GSH)、 glutathione peroxidase (GSH Px)、glutathione reductase (GSH Rd)、glutathione S-transferase (GST)、superoxide dismutase (SOD)与catalase等酵素活性。
结果
1.通过对牛樟芝提取分离纯化工艺及HPLC结果,建立了保肝成份Antcin B标准品的质量控制标准及确效。使用固体分散技术将牛樟芝水及醇提取物浓缩乳化后与固体基质(PEG6000)熔融成固体分散溶液,以滴制法制备牛樟芝滴丸。利用实验设计法找出最佳处方,得到三萜类组分：载体：乳化剂=1：2.5：0.5为牛樟芝滴丸最佳条件。建立完成了牛樟芝滴丸之优化条件研究方法、质量标准及可制备工艺的研究。使得本研究所使用之样品质量均一。
2.生物利用度实验结果,于大白鼠体内测得其Antcin B之最高血中(峰)浓度,牛樟芝滴丸0.0310±0.004μg/ml,牛樟芝粉末0.0291±0.004μg/m1；达最高血中浓度(峰)时间牛樟芝滴丸26min,牛樟芝粉末45mim。AUC/Dose牛樟芝滴丸0.0478,牛樟芝粉末0.00721。由本药代动力学实验得知,牛樟芝滴丸之口服生物利用度,比粉末高6.6倍。
3.治疗组的GOT及GPT指数,与负对照组相较可随着牛樟芝滴丸剂量的增加,呈现剂量相关性的降低。GSH浓度则较负对照组显着的提高；并具剂量相关性。GPx活性,可随着牛樟芝滴丸剂量的增加,逐渐地恢复；Mn-SOD的活性或是Cu/Zn-SOD的活性皆会随着牛樟芝滴丸剂量的增加而逐渐的提高。病理切片观察显示：五倍剂量(5X)牛樟芝滴丸的作用下,肝脏组织内伪小叶形成及发炎细胞浸润的现象由原来的中等程度转为少量程度；同时,中央静脉和门脉区间中隔的形成较不完全,显示肝纤维化的程度较负对照组轻微。
结论1.分离并建立保肝成份Antcin B的质量控制标准;
2.确定最佳牛樟芝滴丸处方,并完成可制备工艺研究;
3.牛樟芝滴丸对于肝脏细胞具有保护作用。
4.牛樟芝滴丸较粉末吸收快、较高吸收度：滴丸能增加三萜类的口服吸收,作用迅速、生物利用度高。
5.牛樟芝滴丸能使因被APAP损坏之肝细胞其粒腺体及网状内皮组织系统恢复正常,对于肝功能指数或是抗氧化酶具有回复作用。提供了牛樟芝滴丸对于肝脏细胞具有保护作用的科学证据。